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Peptide sind kurze Ketten von Aminosäuren, die durch Peptidbindungen miteinander verknüpft sind und eine entscheidende Rolle in vielen biologischen Prozessen spielen. Sie fungieren als Signalmoleküle, Hormone oder Enzyme und sind oft an der Regulation von Zellfunktionen beteiligt. Aufgrund ihrer vielfältigen biologischen Aktivitäten sind Peptide in der Forschung und Medizin von großer Bedeutung, etwa bei der Entwicklung von Therapeutika und Diagnostika.
Die Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) ist eine zentrale Methode zur Analyse von Peptiden. Sie ermöglicht die präzise Trennung, Identifizierung und Quantifizierung von Peptidstrukturen, was für die Qualitätskontrolle in der Peptidsynthese sowie für die Charakterisierung biologischer Proben unerlässlich ist. HPLC bietet eine hohe Auflösung und Empfindlichkeit, was insbesondere bei komplexen Peptidmischungen wichtig ist, um Reinheit, Stabilität und Funktionalität zu gewährleisten.
Die tryptische Verdauung (tryptic digest) ist ein weit verbreitetes Verfahren zur Spaltung von Proteinen in kleinere Peptide. Dabei wird das Enzym Trypsin verwendet, das spezifisch die Peptidbindungen nach den Aminosäuren Lysin und Arginin schneidet. Diese Methode ist besonders nützlich, um große Proteine in handhabbare Peptidfragmente zu zerlegen, die dann weiter analysiert werden können. Sie spielt eine zentrale Rolle in der Proteomik, der Untersuchung von Proteinen und ihren Funktionen (Bottom-Up Verfahren).
Nach der tryptischen Verdauung werden die entstandenen Peptidfragmente häufig mittels Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) analysiert. Die HPLC ermöglicht es, die verschiedenen Peptide basierend auf ihrer Größe, Polarität oder Ladung zu trennen. Durch die Kombination der HPLC mit anderen Analysemethoden, wie der Massenspektrometrie (HPLC-MS), lassen sich Proteine detailliert charakterisieren. Dies ist wichtig für die Identifizierung von Proteinen, die Untersuchung von posttranslationalen Modifikationen sowie für quantitative Analysen in biologischen Proben.
HPLC - Reversed Phase:
Probenvorbereitung - Tryptic Digest:
Probenvorbereitung - Entsalzung und Anreicherung:
Probenvorbereitung - Phosphopeptid Anreicherung:
Probenvorbereitung - Entsalzung von Phosphopeptiden:
Probenvorbereitung - Entferrnung von Phosphopeptiden:
Probenvorbereitung - Aufreinigung und Anreicherung kleiner Proben:
Probenvorbereitung - Peptid Fraktionierung:
HPLC - Reversed Phase:
HPLC - HILIC:
HPLC - SEC:
HPLC - Reversed Phase:
UHPLC - Reversed Phase:
HPLC - Normal Phase:
HPLC - Mixed-Mode:
UHPLC - Reversed Phase:
HPLC - Reversed Phase:
HPLC - HIC:
HPLC - Metallaffinität:
Probenvorbereitung - Digestion:
UHPLC - Reversed Phase:
HPLC - Reversed Phase:
HPLC - IEX:
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