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Proteine

Proteine sind essentielle Makromoleküle, die in allen lebenden Organismen vorkommen und eine Vielzahl von biologischen Funktionen erfüllen, darunter Enzymaktivität, Signalübertragung und Strukturgebung. Ihre genaue Analyse ist entscheidend für das Verständnis biochemischer Prozesse sowie die Entwicklung von Medikamenten und biotechnologischen Produkten. Die Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) ist eine zentrale Methode zur Analyse von Proteinen, da sie eine präzise Trennung und Identifizierung verschiedener Proteinmoleküle ermöglicht. Durch HPLC lassen sich Proteine nach Größe, Ladung oder anderen chemischen Eigenschaften aufschlüsseln, was sie zu einem unverzichtbaren Werkzeug in der biochemischen Forschung und pharmazeutischen Industrie macht.

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Acquity® UPLC Protein BEH SEC Column, 200Å, 1.7 µm, 4.6 mm X 300 mm, 10K - 500K, 1/pkg
186005226
4.380,00 €
XBridge Protein BEH SEC Column, 125Å, 2.5 µm, 2.1 mm X 50 mm, 1/pk
186010060
895,00 €
XBridge Premier Protein BEH C4 300 Å 2.5 µm, 4.6 x 150 mm, 1/pk
186010334
1.020,00 €
XBridge Premier Protein BEH C4 300 Å 2.5 µm, 4.6 x 100 mm, 1/pk
186010333
965,00 €
XBridge Premier Protein BEH C4 300 Å 2.5 µm, 4.6 x 50 mm, 1/pk
186010332
905,00 €
XBridge Premier Protein BEH C4 300 Å 2.5 µm, 2.1 x 150 mm, 1/pk
186010331
1.020,00 €
XBridge Premier Protein BEH C4 300 Å 2.5 µm, 2.1 x 100 mm, 1/pk
186010330
965,00 €
XBridge Premier Protein BEH C4 300 Å 2.5 µm, 2.1 x 50 mm, 1/pk
186010329
905,00 €
ACQUITY Premier Protein BEH C4 300 Å 1.7 µm, 2.1 x 150 mm, 1/pk
186010328
1.150,00 €
ACQUITY Premier Protein BEH C4 300 Å 1.7 µm, 2.1 x 100 mm, 1/pk
186010327
1.090,00 €
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Technische Daten

Die chromatographische Analyse von Proteinen erfordert unterschiedliche Methoden, die je nach den physikalisch-chemischen Eigenschaften der Proteine eingesetzt werden. Hier sind die wichtigsten chromatographischen Methoden, die zur Untersuchung von Proteinen verwendet werden:

 

1. Umkehrphasen Chromatographie

  • Prinzip: Bei der RP-HPLC werden Proteine basierend auf ihrer Hydrophobizität getrennt. Hydrophobere Proteine binden stärker an die Säule und eluieren später.
  • Anwendung: Diese Methode eignet sich gut für die Trennung von Proteinen und Peptiden, die unterschiedliche Hydrophobizitäten aufweisen. Sie wird häufig in der Proteinreinigung und in der Peptidsequenzierung eingesetzt.
  • Vorteil: Hohe Auflösung und gute Reproduzierbarkeit.
  • Nachteil: Denaturierung von Proteinen durch die organischen Lösungsmittel möglich.

 

2. Größenausschlusschromatographie (SEC)

  • Prinzip: Die SEC trennt Proteine basierend auf ihrer Größe (Molekulargewicht). Dabei wandern größere Proteine schneller durch die Säule, da sie die Poren der stationären Phase nicht so leicht durchdringen können wie kleinere Proteine.
  • Anwendung: Besonders nützlich für die Untersuchung von Aggregaten und Oligomerisierungszuständen von Proteinen sowie für die Bestimmung des Molekulargewichts.
  • Vorteil: Native Bedingungen, da keine Denaturierung durch Lösungsmittel erfolgt.
  • Nachteil: Geringere Auflösung im Vergleich zu anderen Methoden.

 

3. Ionenaustauschchromatographie (IEX)

  • Prinzip: Bei der IEX werden Proteine nach ihrer Ladung getrennt. Dabei bindet ein Protein entweder an eine anionische oder kationische stationäre Phase, abhängig von seinem isoelektrischen Punkt (pI). Die Elution erfolgt durch schrittweise Erhöhung der Salzkonzentration in der mobilen Phase.
  • Anwendung: Sehr nützlich zur Trennung von Proteinen mit unterschiedlichen Ladungen, z.B. isoformen Proteinen oder geladenen Verunreinigungen.
  • Vorteil: Hohe Trennleistung für Proteine mit minimalen Unterschieden im pI.
  • Nachteil: Empfindlich gegenüber Schwankungen im pH-Wert.

 

4. Hydrophobe Interaktionschromatographie (HIC)

  • Prinzip: Bei der HIC werden Proteine basierend auf ihrer hydrophoben Interaktion mit der stationären Phase getrennt. Die Bindung der Proteine erfolgt in Gegenwart hoher Salzkonzentrationen, die ihre Hydrophobizität verstärken. Die Elution erfolgt durch schrittweises Verringern der Salzkonzentration.
  • Anwendung: Eignet sich besonders gut für die Trennung von Proteinen, die native, hydrophobe Bereiche aufweisen, ohne dass organische Lösungsmittel verwendet werden müssen.
  • Vorteil: Schonende Trennung von Proteinen unter nativen Bedingungen.
  • Nachteil: Nicht so gut für sehr hydrophile Proteine geeignet.

 

5. Affinitätschromatographie

  • Prinzip: Diese Methode basiert auf der spezifischen Bindung zwischen einem Protein und einem Liganden, der an die stationäre Phase gebunden ist. Ein Beispiel ist die His-Tag-Affinitätschromatographie, bei der Histidin-markierte Proteine an Nickel- oder Kobalt-Ionen binden.
  • Anwendung: Besonders nützlich für die gezielte Reinigung eines Proteins aus komplexen Gemischen, wie Zelllysaten.
  • Vorteil: Hohe Selektivität und Reinheit des Zielproteins.
  • Nachteil: Relativ teuer und kann eine spezielle Vorbehandlung des Proteins erfordern (z.B. Tagging).

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Hersteller Übersicht

AMT

HPLC - Reversed Phase:

  • HALO Protein C4
  • HALO Protein ES-C18
  • HALO Protein Diphenyl

GL Sciences

HPLC - Reversed Phase:

  • ProteoSil C18
  • ProteoSil C4
  • MonoSelect RP-mAb

 

HPLC - HILIC:

  • ProteoSil HILIC

 

HPLC - SEC:

  • ProteoSil SEC

 

HPLC - Mixed-Mode:

  • MonoSelect nPEC

Probenvorbereitung - Entsalzung und Anreicherung:

  • MonoTip C18

 

Probenvorbereitung - Entsalzung:

  • GL-Tip SDB
  • GL-Tip GC

 

Probenvorbereitung - Anreicherung von Phosphoproteinen:

  • Titansphere
  • MonoTip TiO

 

Probenvorbereitung - Aufreinigung und Anreicherung:

  • MonoSpin Series

Imtakt

HPLC - Reversed Phase:

  • Intrada WP-RP
  • Cadenza CW-C18

 

UHPLC - Reversed Phase:

  • Presto FF-C18

Macherey-Nagel

HPLC - Reversed Phase:

  • Nucleodur 300 C4 ec, 5µm
  • Nucleosil 300 C8, 5µm
  • Nucleosil 300 C4, 5µm
  • Nucleodur 300 C18 ec, 5µm

 

HPLC - IEX:

  • Nucleogel SCX, 8µm
  • Nucleogel SAX, 8µm

Mitsubishi

HPLC - IEX:

  • XtalSpeed SP01
  • XtalSpeed DA01

 

HPLC - SEC:

  • MCI GEL CQP06, 10µm
  • MCI GEL CQP10, 10µm
  • MCI GEL CQP30, 10µm

Nacalai Tesque

HPLC - IEX:

  • Cosmogel IEX Type Q

 

HPLC - Reversed Phase:

  • Cosmosil C18-AR-300, 5µm
  • Protein-R, 5µm

 

HPLC - SEC:

  • Cosmosil Diol-II, 5µm

 

HPLC - HIC:

  • Cosmosil HIC, 5µm

Osaka Soda

HPLC - Reversed Phase:

  • Capcell Core WP, 2.7µm
  • Capcell PAK C18 SG300, 5µm
  • Proteonavi, 5µm

Sepax

HPLC - HIC:

  • Proteomix HIC

 

HPLC - IEX:

  • Proteomix IEX

 

HPLC - Reversed Phase:

  • Proteomix RP

 

HPLC - SEC:

  • SRT
  • SRT-C
  • Unix
  • Unix-C
  • Zenix
  • Zenix-C

Shodex

HPLC - Reversed Phase:

  • Silica C18M 4D
  • Asahipak ODP-50 6D
  • Asahipak C4P-50 4D

 

HPLC - SEC:

  • Protein KW Series
  • Protein LW Series
  • OHpak SB-802 HQ
  • Asahipak GF-510 HQ

HPLC - IEX:

  • IEC SP-FT
  • IEC QA-825
  • IEC SP-825
  • IEC DEAE-825
  • IEC CM-825
  • Asahipak ES-502C 7C
  • Asahipak ES-502N 7C

 

HPLC - Mixed-Mode:

  • Asahipak GS-320 7G

Thermo

HPLC - Reversed Phase:

  • Accucore 150-C4
  • ProSwift RP
  • PepSwift

 

HPLC - HIC:

  • MAbPAC HIC Series
  • ProPac HIC

 

HPLC - IEX:

  • ProPac Elite WCX
  • ProPac SAX-1
  • MAbPac SCX
  • ProPac 3R IEX

 

HPLC - Metallaffinitätschromatographie:

  • ProPac IMAC-10

Tosoh

HPLC - SEC:

  • TSKgel SW
  • TSKgel SWXL
  • TSKgel SuperSW
  • TSKgel UltraSW
  • TSKgel UP-SW

 

Proteine - IEX:

  • TSKgel BioAssist S
  • TSKgel BioAssist Q
  • TSKgel Q-STAT
  • TSKgel SP-5PW
  • TSKgel DEAE-5PW
  • TSKgel CM-5PW
  • TSKgel SP-STAT
  • TSKgel CM-STAT
  • TSKgel SP-NPR
  • TSKgel DEAE-NPR
  • TSKgel SuperQ-5PW

 

Proteine - HIC:

  • TSKgel Phenyl-5PW
  • TSKgel Ether-5PW
  • TSKgel Butyl-NPR

 

Proteine - Reversed Phase:

  • TSKgel Protein C4-300
  • TSKgel TMS-250

Waters

UHPLC - HILIC:

  • ACQUITY Glycoprotein BEH Amide, 1.7µm

 

UHPLC - HIC:

  • Protein-Pak Hi Res HIC, 2.5µm

 

HPLC - HIC:

  • Protein-Pak Hi Phenyl, 10µm

 

UHPLC - IEX:

  • BioSuite Anion-Exchange, 2.5µm

HPLC - IEX:

  • BioResolve SCX mAb, 3µm
  • BioSuite DEAE Anion-Exchange, 10µm
  • BioSuite SP Cation-Exchange, 10µm
  • BioSuite Cation-Exchange, 7µm
  • BioSuite CM Cation-Exchange, 10µm
  • BioSuite Q Anion-Exchange, 10µm
  • Protein-Pak Hi Res SP, 7µm
  • Protein-Pak Hi Res Q, 5µm
  • Protein-Pak DEAE 5PW, 12.5µm
  • Protein-Pak SP 5PW, 10µm
  • Protein-Pak Hi Res CM, 7µm

 

UHPLC - Reversed Phase:

  • ACQUITY Protein BEH C4, 1.7µm
  • nanoEase MZ Protein BEH C4, 1.7µm

HPLC - Reversed Phase:

  • BioResolve RP mAb Polyphenyl, 2.7µm
  • BioSuite Phenyl, 10µm
  • DeltaPak C4
  • Symmetry C4 300, 3.5µm, 5µm
  • XBridge Protein BEH C4

 

UHPLC - SEC:

  • ACQUITY Premier Protein SEC
  • BioResolve SEC mAb, 2.5µm
  • XBridge Premier Protein SEC, 2.5µm

 

HPLC - SEC:

  • BioSuite Diol (OH), 5µm
  • Protein-Pak SEC

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