Oligonukleotide

Oligonukleotide sind kurze, synthetisch hergestellte DNA- oder RNA-Sequenzen, die aus wenigen Nukleotiden bestehen. Sie spielen eine wichtige Rolle in der molekularen Biologie und Medizin, insbesondere in der Genforschung, Diagnostik und Therapie. In der Medizin werden Oligonukleotide vor allem als Therapeutika eingesetzt, um spezifische Gene zu beeinflussen. Dazu gehören Antisense-Oligonukleotide, die die Genexpression unterdrücken, und siRNA (small interfering RNA), die gezielt mRNA abbauen, um die Synthese krankheitsverursachender Proteine zu verhindern. Diese Technologien bieten vielversprechende Ansätze zur Behandlung genetischer Erkrankungen, Krebs und viraler Infektionen.

 

Die Analyse von Oligonukleotiden ist von entscheidender Bedeutung, da sie die Qualität, Reinheit und Wirksamkeit dieser Moleküle in biomedizinischen Anwendungen sicherstellt. Präzise Analysen ermöglichen es, Sequenzfehler zu erkennen, die Funktionalität und Stabilität der Oligonukleotide zu überprüfen und sicherzustellen, dass sie die gewünschte biologische Wirkung entfalten. Besonders in der therapeutischen Anwendung, wie bei Antisense-Oligonukleotiden oder siRNA, ist eine genaue Charakterisierung notwendig, um unerwünschte Nebenwirkungen und eine ineffektive Behandlung zu vermeiden. Methoden wie Massenspektrometrie, HPLC und Sequenzierung spielen dabei eine zentrale Rolle.

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Technische Daten

Unterschiede zwischen Nukleotiden, Oligonukleotiden und DNA/RNA

Die Unterschiede zwischen der Oligonukleotid-, Nukleotid- und DNA/RNA-Analyse mittels HPLC liegen in den Zielmolekülen und den Analysemethoden:

 

  • Oligonukleotid-Analyse: Hier werden kurze Ketten von Nukleotiden (Oligonukleotide) analysiert. Oft wird Reversed-Phase HPLC (RP-HPLC) eingesetzt, um verschiedene Oligonukleotide basierend auf ihrer Länge und chemischen Modifikationen zu trennen.
  • Nukleotid-Analyse: Einzelne Nukleotide (ATP, GTP, CTP, UTP etc.) werden analysiert. Hier wird häufig Anionenaustausch-HPLC verwendet, um die Nukleotide anhand ihrer Ladung und Größe zu trennen.
  • DNA/RNA-Analyse: Bei der Analyse von größeren DNA- oder RNA-Molekülen wird HPLC zur Reinheitsprüfung und Quantifizierung genutzt. Spezielle Säulen und Methoden wie Größenausschluss-HPLC oder Affinitätschromatographie können verwendet werden, um intakte Nukleinsäuren oder ihre Fragmente zu trennen.

Applikationen

Oligonukleotid Trennung mit guter Peakform mit AMT HALO Oligo C18

  • Trennung von Oligonukleotiden bis zu 60 Basen (60 mer) bei guter Peakform

Peakidentitäten

1. 10 mer  2. 15 mer  3. 20 mer  4. 25 mer  5. 30 mer  6. 40 mer  7. 50 mer  8. 60 mer  * Tris HCl/EDTA

Säule

AMT: HALO 120Å OLIGO C18, 2.7µm, 50x2.1mm

Competitor: OLIGO 130Å C18, 1.7µm, 50x2.1mm

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Hersteller Übersicht




Hamilton

HPLC - Reversed Phase:

  • PRP-C18, 5µm





Osaka Soda

UHPLC - Reversed Phase:

  • Capcell PAK C18, IF, 1.8µm






Waters

UHPLC - Reversed Phase:

  • ACQUITY UPLC Oligonucleotide BEH C18, 1.7µm
  • ACQUITY Premier Oligonucleotide BEH C18, 1.7µm
  • ACQUITY Premier CSH, 1.7µm
  • XBridge Oligonucleotide BEH C18, 2.5µm
  • XTerra MS C18, 2.5µm

 

Probenvorbereitung:

  • OASIS HLB SPE

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