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Nukleotide sind die grundlegenden Bausteine von Nukleinsäuren wie DNA und RNA und bestehen aus einer Base (Adenin, Guanin, Cytosin, Thymin oder Uracil), einem Zucker (Ribose oder Desoxyribose) und einer Phosphatgruppe. Sie spielen eine zentrale Rolle in vielen biologischen Prozessen, einschließlich der Energiespeicherung (z.B. ATP) und der Signalübertragung.
Die Analyse von Nukleotiden mittels Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) ist eine gängige Methode zur Trennung, Identifizierung und Quantifizierung dieser Moleküle. Dabei werden verschiedene HPLC-Techniken eingesetzt, wie z.B. Anionenaustausch- oder Reversed-Phase-HPLC, die Nukleotide aufgrund ihrer Ladung, Polarität und hydrophoben Eigenschaften trennen. HPLC ermöglicht eine präzise und effiziente Analyse von Nukleotid-Mischungen, was in der Biochemie, Molekularbiologie und Diagnostik von großer Bedeutung ist.
Der Unterschied zwischen Nukleotiden, Nukleosiden und Nukleobasen liegt in ihrer chemischen Struktur:
Nukleotide = Nukleobase + Zucker + Phosphat
Nukleoside = Nukleobase + Zucker
Nukleobasen = die reinen Basen.
Die Unterschiede zwischen Nukleotiden, Oligonukleotiden und DNA/RNA liegen in ihrer Struktur und Funktion:
1. Adenosine monophosphate (AMP)
2. Guanosine monophosphate (GMP)
3. Adenosine diphosphate (ADP)
4. Guanosine diphosphate (GDP)
5. Adenosine triphosphate (ATP)
6. Guanosine triphosphate (GTP)
Säule: HALO Penta-HILIC 100x2.1mm, 2.7µm (92812-605)
Mobile Phase A: 50/50 Acetonitril/0.025M Ammoniumphosphat (pH 6)
Mobile Phase B: 75/25 Acetonitril/0.025M Ammoniumphosphat (pH 6)
Gradient:
Zeit / min | %B |
0 | 90 |
8 | 40 |
Flussrate: 0.3 mL/min
Rückdruck: 76 bar
Temperatur: 50 °C
Detektion: UV, 260 nm
Injektionsvolumen: 1 µL
Probenlösungsmittel: Mobile Phase B
1. Unknown 2. 5-AMP 3. 5-GMP 4. 5-IMP 5. 5-TMP 6. 3-AMP 7. 2-AMP 8. 5-ADP 9. 3,5-cAMP 10. 3,5-cGMP 11. 5-GDP 12. 5-IDP 13. 5-TDP
Säule: Inertsil ODS-3V 150x4.6mm, 5µm
Mobile Phase A: 5mM Tetrabutylammoniumbromid + 20mM KH2PO4 (pH 3.5)
Mobile Phase B: 5mM Tetrabutylammoniumbromid + 20mM KH2PO4 (pH 3.5)/Acetonitril 40/60
Gradient:
Zeit / min | %A | %B |
0 | 95 | 5 |
5 | 95 | 5 |
35 | 76 | 24 |
Flussrate: 1 mL/min
Temperatur: 40 °C
Detektion: 40 °C
Injektionsvolumen: 5 µL
HPLC - HILIC:
HPLC - Reversed Phase:
HPLC - Reversed Phase:
HPLC - IEX:
HPLC - Reversed Phase:
HPLC - Reversed Phase:
HPLC - IEX:
HPLC - IEX:
HPLC - Reversed Phase:
UHPLC - Reversed Phase:
HPLC - HILIC:
HPLC - Reversed Phase:
HPLC - HILIC:
HPLC - IEX:
HPLC - Ionenchromatographie:
HPLC - Reversed Phase:
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