Nukleotide

Nukleotide sind die grundlegenden Bausteine von Nukleinsäuren wie DNA und RNA und bestehen aus einer Base (Adenin, Guanin, Cytosin, Thymin oder Uracil), einem Zucker (Ribose oder Desoxyribose) und einer Phosphatgruppe. Sie spielen eine zentrale Rolle in vielen biologischen Prozessen, einschließlich der Energiespeicherung (z.B. ATP) und der Signalübertragung.

 

Die Analyse von Nukleotiden mittels Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) ist eine gängige Methode zur Trennung, Identifizierung und Quantifizierung dieser Moleküle. Dabei werden verschiedene HPLC-Techniken eingesetzt, wie z.B. Anionenaustausch- oder Reversed-Phase-HPLC, die Nukleotide aufgrund ihrer Ladung, Polarität und hydrophoben Eigenschaften trennen. HPLC ermöglicht eine präzise und effiziente Analyse von Nukleotid-Mischungen, was in der Biochemie, Molekularbiologie und Diagnostik von großer Bedeutung ist.

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Technische Daten

Unterschied zwischen Nukleotiden, Nukleosiden und Nukleobasen

Der Unterschied zwischen Nukleotiden, Nukleosiden und Nukleobasen liegt in ihrer chemischen Struktur:

 

  • Nukleotide: Sie bestehen aus drei Komponenten – einer Nukleobase (Adenin, Guanin, Cytosin, Thymin oder Uracil), einem Zucker (Ribose in RNA, Desoxyribose in DNA) und einer oder mehreren Phosphatgruppen. Nukleotide sind die Bausteine von DNA und RNA und spielen auch eine Rolle im Energiestoffwechsel (z.B. ATP).
  • Nukleoside: Nukleoside bestehen aus einer Nukleobase und einem Zucker (Ribose oder Desoxyribose), aber ohne die Phosphatgruppe. Sie sind somit ein Vorläufer von Nukleotiden und entstehen durch das Fehlen der Phosphatgruppe.
  • Nukleobasen: Nukleobasen sind die stickstoffhaltigen Basen, die in Nukleotiden und Nukleosiden enthalten sind. Es gibt fünf Hauptbasen: Adenin, Guanin, Cytosin, Thymin (nur in DNA) und Uracil (nur in RNA).

 

Nukleotide = Nukleobase + Zucker + Phosphat 

Nukleoside = Nukleobase + Zucker 

Nukleobasen = die reinen Basen.


Unterschied Nukleotide, Oligonukleotide und DNA/RNA

Die Unterschiede zwischen Nukleotiden, Oligonukleotiden und DNA/RNA liegen in ihrer Struktur und Funktion:

 

  • Nukleotide: Nukleotide sind die Grundbausteine von Nukleinsäuren. Sie bestehen aus einer Nukleobase (Adenin, Guanin, Cytosin, Thymin oder Uracil), einem Zucker (Ribose oder Desoxyribose) und einer Phosphatgruppe. Sie dienen als Bausteine für größere Moleküle wie DNA und RNA und spielen auch in anderen biologischen Prozessen, wie der Energieübertragung (ATP), eine wichtige Rolle.
  • Oligonukleotide: Oligonukleotide sind kurze Ketten von Nukleotiden, typischerweise zwischen 2 und 20 Nukleotide lang. Sie werden häufig in der Forschung als Sonden, Primer oder für gentechnische Anwendungen verwendet, da sie spezifische Sequenzen enthalten, die an DNA- oder RNA-Abschnitte binden können.
  • DNA/RNA: DNA (Desoxyribonukleinsäure) und RNA (Ribonukleinsäure) sind lange Polymere aus Nukleotiden. DNA besteht aus Desoxyribonukleotiden und speichert die genetische Information, während RNA aus Ribonukleotiden besteht und in verschiedenen Formen an der Proteinsynthese und Genregulation beteiligt ist. DNA ist in der Regel doppelsträngig, während RNA meist einzelsträngig vorliegt.

Applikationen

HILIC Trennung von Adenosin Phosphaten mit AMT HALO Penta-HILIC

Peakidentitäten

1. Adenosine monophosphate (AMP)

2. Guanosine monophosphate (GMP)

3. Adenosine diphosphate (ADP)

4. Guanosine diphosphate (GDP)

5. Adenosine triphosphate (ATP)

6. Guanosine triphosphate (GTP)

Testbedingungen

Säule: HALO Penta-HILIC 100x2.1mm, 2.7µm (92812-605)

Reversed Phase Analyse von Nukelotiden mit GL Sciences Inertsil ODS-3V

Peakidentitäten

1. Unknown  2. 5-AMP  3. 5-GMP  4. 5-IMP  5. 5-TMP  6. 3-AMP  7. 2-AMP  8. 5-ADP  9. 3,5-cAMP  10. 3,5-cGMP  11. 5-GDP  12. 5-IDP  13. 5-TDP

Testbedingungen

Säule: Inertsil ODS-3V 150x4.6mm, 5µm

Mobile Phase A: 5mM Tetrabutylammoniumbromid + 20mM KH2PO4 (pH 3.5)

Mobile Phase B: 5mM Tetrabutylammoniumbromid + 20mM KH2PO4 (pH 3.5)/Acetonitril 40/60

Gradient: 

Zeit / min

%A

%B

0

95

5

5

95

5

35

76

24

Flussrate: 1 mL/min

Temperatur: 40 °C

Detektion: 40 °C

Injektionsvolumen: 5 µL

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Hersteller Übersicht


AMT

HPLC - HILIC:

  • HALO Penta-HILIC, 2.7µm

ChromaNik

HPLC - Reversed Phase:

  • Sunniest RP-AQUA, 3µm
  • SunShell RP-AQUA, 2.6µm







Sepax

HPLC - Reversed Phase:

  • HP-C18, 5µm

 

HPLC - IEX:

  • Proteomix SAX, 5µm



Thermo

HPLC - Reversed Phase:

  • Accucore aQ, 2.6µm

 

HPLC - HILIC:

  • Accucore Amide-HILIC, 2.6µm

 

HPLC - IEX:

  • DNAPac PA100

 

HPLC - Ionenchromatographie:

  • IonPac AS11-HC, 4µm

Tosoh

HPLC - Reversed Phase:

  • TSKgel ODS-120T, 5µm

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