DNA - RNA

DNA (Desoxyribonukleinsäure) und RNA (Ribonukleinsäure) sind essentielle Biomoleküle, die als Träger genetischer Informationen fungieren und eine zentrale Rolle in der Biologie aller Lebewesen spielen. DNA speichert die genetischen Informationen, die für die Entwicklung, Funktion und Reproduktion von Organismen notwendig sind, während RNA als Vermittler bei der Übertragung dieser Informationen und bei der Proteinsynthese dient. Die strukturellen Unterschiede zwischen DNA und RNA liegen in ihren Zuckerkomponenten und den Basen, die sie enthalten, was ihnen unterschiedliche Funktionen im Zellstoffwechsel verleiht.

 

Die Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) ist eine analytische Methode, die häufig zur Trennung, Identifizierung und Quantifizierung von DNA- und RNA-Bestandteilen verwendet wird. Diese Technik ist besonders wichtig, da sie eine hohe Präzision und Empfindlichkeit bietet, was entscheidend für die Analyse von Nukleinsäuren in der Forschung und Diagnostik ist. Durch die Anwendung von HPLC können Forscher spezifische Nukleotide, Nukleoside und deren Modifikationen effizient analysieren, was unerlässlich für das Verständnis genetischer Prozesse und die Entwicklung therapeutischer Ansätze ist.

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Technische Daten

Unterschiede zwischen Nukleotiden, Oligonukleotiden und DNA/RNA

Die Begriffe Nucleotid, Oligonucleotid und DNA/RNA beziehen sich auf verschiedene molekulare Größenordnungen in der Analyse von Nukleinsäuren, die durch HPLC untersucht werden können.

 

  • Nucleotide sind die Grundbausteine von DNA und RNA, bestehend aus einer Base, einem Zucker und einer Phosphatgruppe. Bei der HPLC-Analyse von Nukleotiden geht es darum, einzelne Nucleotide zu identifizieren und zu quantifizieren. Diese Analyse kann z.B. verwendet werden, um den Gehalt spezifischer Nucleotide in einer Probe zu bestimmen oder ihre Modifikationen zu untersuchen.
  • Oligonucleotide sind kurze Ketten von Nucleotiden, typischerweise mit einer Länge von bis zu etwa 20-30 Basenpaaren. HPLC wird verwendet, um die Reinheit, Zusammensetzung und Sequenz dieser kurzen DNA- oder RNA-Fragmente zu überprüfen. Diese Analyse ist besonders wichtig bei der Herstellung synthetischer Oligonucleotide, die in der Forschung oder Medizin verwendet werden.
  • Die DNA/RNA-Analyse mittels HPLC umfasst die Untersuchung längerer DNA- oder RNA-Stränge, die mehrere Hundert bis Tausende von Basenpaaren umfassen können. Bei dieser Analyse können Struktur, Modifikationen, und Fragmentierungsmuster untersucht werden. Für lange Stränge wird HPLC oft in Kombination mit anderen Techniken wie Massenspektrometrie oder Gel-Elektrophorese verwendet, um die vollständige Sequenz oder Struktur zu analysieren.

Applikationen

Trennung verschiedener RNA Kettenlängen mit Concise RiboSep RNA 50x7.8mm, 2µm

Peakidentitäten

1. 100nt  2. 200nt  3. 300nt  4. 400nt  5. 500nt

Testbedingungen

Säule: RiboSep RNA 50x7.8mm, 2µm

Mobile Phase: A: 0.1M TEA; B: 0.1M TEAA, 25% ACN

Isokratisch: 15min

Injektionsvolumen: 10µL

Trennung von verschiedenen DNA Oligonukleotiden mit ADS Biotec DNASep

1. n-2 ( 5'-AAA AGT CCG TGA GA-3' ; 16.4 min)

2. n-1 ( 5'-CAA AAG TCC GTG AGA-3' ; 17.1 min)

3. 16mer (5'-ACA AAA GTC CGT GAG A-3' ; 17.8 min)

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DNA - Reversed Phase:

  • Proteomix RP-300, 10µm

 

DNA - IEX:

  • Proteomix WAX, 5µm

 

DNA - SEC:

  • Zenix SEC-300, 3µm

 

RNA - IEX:

  • Proteomix WAX, 5µm

 

RNA - SEC:

  • SRT SEC-2000, 5µm

 

mRNA - Reversed Phase:

  • Proteomix RP-1000, 5µm

 

mRNA - SEC:

  • Zenix SEC-300, 3µm
  • SRT SEC-1000, 5µm

 

mRNA - Affinitätschromatographie:

  • Monomix dT(20), 30µm

 

circular RNA - Reversed Phase:

  • Bio-C18, 5µm

 

circular RNA - SEC:

  • SRT SEC-2000, 5µm

 

circular mRNA - SEC:

  • SRT SEC-1000, 5µm

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mRNA - Reversed Phase:

  • Shim-pack Scepter Claris C18, 1.9µm

Shodex

tRNA - IEX:

  • IEC DEAE-825



Waters

DNA - Reversed Phase:

  • ACQUITY Peptide Separation Technology BEH300 C18, 1.7µm

 

DNA - IEX:

  • Protein-Pak Hi Res Q, 5µm

 

dsDNA - IEX:

  • Protein-Pak Hi Res Q, 5µm

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