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BIOshell Säulen von Merck Supelco bestehen aus Core-Shell Partikeln für Biotrennungen, die von Glykanen bis zu großen Proteinen reichen. Diese Säulen sind mit HPLC- und UHPLC-Systemen sowie für die MS-Detektion kompatibel.
BIOshell IgG 1000 Å: für mAbs, ADCs, Biosimilars, H/D-Austausch, mAb-Fragmente
BIOshell A400 Protein: mAbs, ADCs, Biosimilars, Proteine, mAb-Fragmente
BIOshell A160 Peptid: für tryptic digest, posttranslationale Modifikationen, Polypeptide
BIOshell Glycan: für Oligosaccharide mittels HILIC
Phase | Modifizierung | Partikelgröße | Porengröße | USP | Tmax |
BIOshell IgG 1000 Å C4 | C4 | 2.7 μm | 1000 Å | L26 | 90 °C |
BIOshell IgG 1000 Å C18 | C18 | 2.7 μm | 1000 Å | L1 | 90 °C |
BIOshell IgG 1000 Å Diphenyl | Diphenyl | 2.7 μm | 1000 Å | L11 | 90 °C |
Phase | Modifizierung | Partikelgröße | Porengröße | USP | Tmax |
BIOshell A400 Protein C4 | C4 | 3.4 μm | 400 Å | L26 | 90 °C |
BIOshell A400 Protein C18 | C18 | 3.4 μm | 400 Å | L1 | 90 °C |
Phase | Modifizierung | Partikelgröße | Porengröße | USP | Tmax | pH Bereich |
BIOshell A160 Peptide Phenyl-Hexyl | Hexyl-Ph | 2.7 μm | 160 Å | L11 | 90 °C | 1.0-8.0 |
BIOshell A160 Peptide C18 | C18 | 2, 2.7, 5 μm | 160 Å | L1 | 90 °C | 1.0-8.0 |
BIOshell A160 Peptide Cyano | CN | 2.7, 5 μm | 160 Å | L10 | 90 °C | 1.0-8.0 |
Phase | Modifizierung | Partikelgröße | Porengröße | Kohlenstoffgehalt | Oberfläche | USP | Tmax |
BIOshell Glycan | proprietary pentahydroxy ligand | 2.7 μm | 90 Å | 3.2 %C | 135 m²/g | L95 | 65 °C |
Messung von Denosumab mit unterschiedlichen Säulen.
Testbedinungen:
Säulen: BIOshell™ IgG 1000 Å C4, 15 cm x 2.1 mm I.D., 2.7 μm
BIOshell™ IgG 1000 Å C18, 15 cm x 2.1 mm I.D., 2.7 μm
BIOshell™ IgG 1000 Å Diphenyl, 15 cm x 2.1 mm I.D., 2.7 μm
Mobile Phase A: 2:10:88 n-Propanol/Acetonitril/Wasser (0.1% v/v Difluoressigsäure)
Mobile Phase B: 70:20:10 n-Propanol/Acetonitril/Wasser (0.1% v/v Difluoressigsäure)
Gradient: 16% B to 26% B in 20 min
Fluss: 0.2 mL/min
Temperatur: 80°C
Detektion: UV, 280 nm
Injektionsvolumen: 2 µL
Probe: Denosumab, 2 mg/ml, Wasser (0,1 % v/v Trifluoressigsäure)
Monoklonale Antikörper sind einzigartige Moleküle und können daher mit verschiedenen Phasenchemien unterschiedlich interagieren.
Die nummerierten Peaks entsprechen den IgG2-Disulfidbindungsvarianten.
Schnelle Proteintrennungen mittels BIOshell™ A400.
1. lysozyme; chicken 14.3 kDa
2. haptoglobulin, phenotype 1-1; human 96 kDa
3. glutamate dehydrogenase; bovine 332 kDa
4. ß-galactosidase; E. coli 465 kDa
5. lactate dehydrogenase contaminant
6. lactate dehydrogenase; rabbit 140 kDa
Testbedinungen:
Säule: BIOshell™ A400 Protein C4, 5 cm x 2.1 mm I.D., 3.4 μm
Mobile Phase A: 75:25 (0,1% TFA in Wasser):(0,1% TFA in Acetonitril)
Mobile Phase B: 25:75 (0,1 % TFA in Wasser):(0,1 % TFA in Acetonitril)
Gradient: 12 bis 100% B in 1 min; gehalten bei 100% B für 1 min
Fluss: 0.4 mL/min
Temperatur: 90°C
Detektor: UV, 215 nm
Injektionsvolumen: 1 µL
Probe: Proteinmischung, unterschiedliche Konzentration, Wasser (0,1% TFA)
Aufgrund der flachen, porösen Schale können Proteintrennungen in weniger als einer Minute mit der BIOshell™ A400-Säule durchgeführt werden.
Messung von Aminosäurensequenzen mit unterschiedlichen Säulen.
1. FTISADTSKNTAYLQMNSLR
2. LSCAASGFNIKDTYIHWVR
3. GFYPSDIAVEWESNGQPENNYK
4. LLIYSASFLYSGVPSR
5. SGTASVVCLLNNFYPR
6. SCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPK
7. VVSVLTVLHQDWLNGKEYK
Testbedinungen:
Säulen: BIOshell™ A160 Peptide CN, 10 cm x 2.1 mm I.D., 2.7 μm
BIOshell™ A160 Peptide Phenyl-Hexyl, 10 cm x 2.1 mm I.D., 2.7 μm
BIOshell™ A160 Peptide C18, 10 cm x 2.1 mm I.D., 2.7 μm
Mobile Phase A: 10 mM Difluoressigsäure in Wasser
Mobile Phase B: 10 mM Difluoressigsäure in Acetonitril
Gradient: 2% B zu 50% B in 60 min
Temperatur: 60°C
Detektion: MSD, ESI-(+3.5 kV)
Injektionsvolumen: 5 μL eines Aufschlusses von 0.2 mg/mL
Probe: Tryptische Peptide, unterschiedliche Konzentration, in 50 mM Tris-HCl/1,5 M Guanidin-HCl mit 0,25% Ameisensäure
Eine bessere Sequenzabdeckung durch eine bessere Auflösung kritischer Paare kann durch die Verwendung orthogonaler Phasenchemien zu C18 erreicht werden.
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