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Nukleotide
Nukleotide sind die grundlegenden Bausteine von Nukleinsäuren wie DNA und RNA und bestehen aus einer Base (Adenin, Guanin, Cytosin, Thymin oder Uracil), einem Zucker (Ribose oder Desoxyribose) und einer Phosphatgruppe. Sie spielen eine zentrale Rolle in vielen biologischen Prozessen, einschließlich der Energiespeicherung (z.B. ATP) und der Signalübertragung.
Die Analyse von Nukleotiden mittels Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) ist eine gängige Methode zur Trennung, Identifizierung und Quantifizierung dieser Moleküle. Dabei werden verschiedene HPLC-Techniken eingesetzt, wie z.B. Anionenaustausch- oder Reversed-Phase-HPLC, die Nukleotide aufgrund ihrer Ladung, Polarität und hydrophoben Eigenschaften trennen. HPLC ermöglicht eine präzise und effiziente Analyse von Nukleotid-Mischungen, was in der Biochemie, Molekularbiologie und Diagnostik von großer Bedeutung ist.
Technische Daten
Unterschied zwischen Nukleotiden, Nukleosiden und Nukleobasen
Der Unterschied zwischen Nukleotiden, Nukleosiden und Nukleobasen liegt in ihrer chemischen Struktur:
- Nukleotide: Sie bestehen aus drei Komponenten – einer Nukleobase (Adenin, Guanin, Cytosin, Thymin oder Uracil), einem Zucker (Ribose in RNA, Desoxyribose in DNA) und einer oder mehreren Phosphatgruppen. Nukleotide sind die Bausteine von DNA und RNA und spielen auch eine Rolle im Energiestoffwechsel (z.B. ATP).
- Nukleoside: Nukleoside bestehen aus einer Nukleobase und einem Zucker (Ribose oder Desoxyribose), aber ohne die Phosphatgruppe. Sie sind somit ein Vorläufer von Nukleotiden und entstehen durch das Fehlen der Phosphatgruppe.
- Nukleobasen: Nukleobasen sind die stickstoffhaltigen Basen, die in Nukleotiden und Nukleosiden enthalten sind. Es gibt fünf Hauptbasen: Adenin, Guanin, Cytosin, Thymin (nur in DNA) und Uracil (nur in RNA).
Nukleotide = Nukleobase + Zucker + Phosphat
Nukleoside = Nukleobase + Zucker
Nukleobasen = die reinen Basen.
Unterschied Nukleotide, Oligonukleotide und DNA/RNA
Die Unterschiede zwischen Nukleotiden, Oligonukleotiden und DNA/RNA liegen in ihrer Struktur und Funktion:
- Nukleotide: Nukleotide sind die Grundbausteine von Nukleinsäuren. Sie bestehen aus einer Nukleobase (Adenin, Guanin, Cytosin, Thymin oder Uracil), einem Zucker (Ribose oder Desoxyribose) und einer Phosphatgruppe. Sie dienen als Bausteine für größere Moleküle wie DNA und RNA und spielen auch in anderen biologischen Prozessen, wie der Energieübertragung (ATP), eine wichtige Rolle.
- Oligonukleotide: Oligonukleotide sind kurze Ketten von Nukleotiden, typischerweise zwischen 2 und 20 Nukleotide lang. Sie werden häufig in der Forschung als Sonden, Primer oder für gentechnische Anwendungen verwendet, da sie spezifische Sequenzen enthalten, die an DNA- oder RNA-Abschnitte binden können.
- DNA/RNA: DNA (Desoxyribonukleinsäure) und RNA (Ribonukleinsäure) sind lange Polymere aus Nukleotiden. DNA besteht aus Desoxyribonukleotiden und speichert die genetische Information, während RNA aus Ribonukleotiden besteht und in verschiedenen Formen an der Proteinsynthese und Genregulation beteiligt ist. DNA ist in der Regel doppelsträngig, während RNA meist einzelsträngig vorliegt.
Applikationen
HILIC Trennung von Adenosin Phosphaten mit AMT HALO Penta-HILIC
Peakidentitäten
1. Adenosine monophosphate (AMP)
2. Guanosine monophosphate (GMP)
3. Adenosine diphosphate (ADP)
4. Guanosine diphosphate (GDP)
5. Adenosine triphosphate (ATP)
6. Guanosine triphosphate (GTP)
Testbedingungen
Säule: HALO Penta-HILIC 100x2.1mm, 2.7µm (92812-605)
Reversed Phase Analyse von Nukelotiden mit GL Sciences Inertsil ODS-3V
Peakidentitäten
1. Unknown 2. 5-AMP 3. 5-GMP 4. 5-IMP 5. 5-TMP 6. 3-AMP 7. 2-AMP 8. 5-ADP 9. 3,5-cAMP 10. 3,5-cGMP 11. 5-GDP 12. 5-IDP 13. 5-TDP
Testbedingungen
Säule: Inertsil ODS-3V 150x4.6mm, 5µm
Mobile Phase A: 5mM Tetrabutylammoniumbromid + 20mM KH2PO4 (pH 3.5)
Mobile Phase B: 5mM Tetrabutylammoniumbromid + 20mM KH2PO4 (pH 3.5)/Acetonitril 40/60
Gradient:
Zeit / min | %A | %B |
0 | 95 | 5 |
5 | 95 | 5 |
35 | 76 | 24 |
Flussrate: 1 mL/min
Temperatur: 40 °C
Detektion: 40 °C
Injektionsvolumen: 5 µL
Downloads
Hersteller Übersicht
AMT
HPLC - HILIC:
- HALO Penta-HILIC, 2.7µm
ChromaNik
HPLC - Reversed Phase:
- Sunniest RP-AQUA, 3µm
- SunShell RP-AQUA, 2.6µm
GL Sciences
HPLC - Reversed Phase:
- Inertsil ODS-2, 5µm
- Inertsil ODS-3V, 5µm
- InertSustain NH2, 5µm
- Inertsil NH2, 5µm
- InertSustain C30, 5µm
- Inertsil ODS-4, 5µm
HPLC - Mixed-Mode:
- InertSustain AX-C18, 3µm
UHPLC - HILIC:
- InertSustain Amide, 1.9µm
HPLC - IEX:
- Inertsil AX, 5µm
- GL Sciences Inertsil AX Analysis of 5 Nucleotides
- Gl Sciences Inertsil NH2 Analysis of Nucleotides
- GL Sciences Inertsil ODS-2 Nucleotides
- GL Sciences Inertsil ODS-2 Nucleotides Capillary Column
- GL Sciences Inertsil ODS-3V Analysis of Bases of Nucleic and Nucleotides
- GL Sciences Inertsil ODS-3V Analysis of Nucleotides
- GL Sciences Inertsil ODS-4 Analysis of Nucleotides
- GL Sciences InertSustain Amide Analysis of Nucleotides and Nucleosides
- GL Sciences InertSustain AX-C18 Analysis of Nucleotides and Cyclic Nucleotides
- GL Sciences InertSustain C30 Analysis of ATP related Compounds and Cyclic Nucleotides
- GL Sciences InertSustain NH2 Analysis of Nucleotides
Hamilton
HPLC - Reversed Phase:
- PRP-1, 5µm
Helix
HPLC - Mixed-Mode:
- Amaze HD
- Amaze HA, 3µm
- Coresep 100, 2.7µm
- Amaze TCH, 3µm
- Coresep SB, 5µm
- Helix Amaze HA Analysis of Adenosine Diphosphate and Adenosine Triphosphate
- Helix Amaze HD Analysis of Adenosine and Adenine
- Helix Amaze HD Analysis of Nucleosides and Nucleoside Derivatives
- Helix Amaze TCH Separation of Nucleobases and Nucleosides
- Helix Coresep 100 Ultra-fast Separation of Nucleobases
- Helix Coresep SB Separation of Nine Nucleotides
Imtakt
HPLC - Mixed-Mode:
- Intrada Organic Acid
HPLC - Reversed Phase:
- Unison UK-Amino
UHPLC - Reversed Phase:
- Dacapo DX-C18, 2.5µm
- Imtakt Intrada Organic Acid Cyclic Mononucleotides
- Imtakt Union UK-Amino Mononucleotides
- Imtakt Unison UK-Amino Adenosine Phosphates
- Imtakt Decapo DX-C18 Nucleosides and bases
- Imtakt Unison UK-Amino Nucleosides and bases
- Imtakt Intrada Organic Acid Nucleoside Triphosphates
- Imtakt Intrada Organic Acid Nucleoside Triphosphates
Macherey-Nagel
HPLC - IEX:
- Nucleogel SAX, 8µm
HPLC - Reversed Phase:
- Nucleodur PolarTec, 3µm
- Nucleosil C18, 5µm
HPLC - HILIC:
- Nucleodur HILIC, 5µm
- Nucleoshell HILIC, 2.7µm
- Macherey-Nagel Nucleodur HILIC Separation of Adenosine
- Macherey-Nagel Nucleodur HILIC Guanosine Phosphates
- Macherey-Nagel Nucleodur PolarTec Nucleotides
- Macherey-Nagel Nucleogel SAX Nucleotides
- Macherey-Nagel Nucleoshell HILIC Nucleotides
- Macherey-Nagel Nucleoshell HILIC Separation of eight Nucleotides
- Macherey-Nagel Nucleosil C18 Detection of Nucleotides and Related Compounds
Osaka Soda
HPLC - IEX:
- Capcell PAK NH2, 5µm
HPLC - Reversed Phase:
- Capcell PAK ADME, 5µm
- Capcell CORE AQ, 2.7µm
Sepax
HPLC - Reversed Phase:
- HP-C18, 5µm
HPLC - IEX:
- Proteomix SAX, 5µm
Shimadzu
HPLC - IEX:
- Shim-pack WAX-1, 3µm
HPLC - Reversed Phase:
- Shm-pack GIST C18-AQ, 3µm
- Shim-pack Scepter C18, 3µm
UHPLC - Reversed Phase:
- Shim-pack XR-ODSIII, 2.2µm
HPLC - HILIC:
- Shim-pack Mix-HILIC, 5µm
- Shimadzu Shim-pack Mix HILIC Comprehensive Analysis of Hydrophilic Metabolites
- Shimadzu Shim-pack WAX-1 Analysis of Mononucleotides
- Shimadzu Shim-pack XR-ODSIII Ultrahigh Separation Analysis of Nucleotides
- Shimadzu Shim-pack GIST C18-AQ Analysis of Nucleic Acid Related Substances
- Shimadzu Shim-pack Scepter C18 Achieving Improved Sensitivity and Reliable Analytical Performances in Nucleotides Analysis
Shodex
HPLC - Mixed-Mode:
- RSpak NN-814
- Asahipak GS-320 HQ
HPLC - Reversed Phase:
- RSpak DE-613
- RSpak DE-413
HPLC - IEX:
- IEC DEAE-825
- Shodex Asahipak GS-320 HQ Adenine Nucleotides in Red Blood Cell
- Shodex Asahipak GS-320 HQ Nucleobases, Nucleosides and Nucleotides
- Shodex Asahipak GS-320 HQ Umami Nucleic Acids
- Shodex IEC DEAE-825 Nucleotides
- Shodex Asahipak GS-320 HQ Adenosine Derivatives
- Shodex Asahipak GS-320 HQ Analysis of ATP and its Related Substances in Muscle of Fish and Shellfish
- Shodex Asahipak GS-320 HQ Cyclic AMP and AMP
- Shodex Asahipak GS-320 HQ Nucleobases
- Shodex RSpak DE-413 Nucleobases
- Shodex RSpak DE-613 Nucleobases and Nucleosides
- Shodex RSpak NN-814 Nucleobases and Nucleosides
Thermo
HPLC - Reversed Phase:
- Accucore aQ, 2.6µm
HPLC - HILIC:
- Accucore Amide-HILIC, 2.6µm
HPLC - IEX:
- DNAPac PA100
HPLC - Ionenchromatographie:
- IonPac AS11-HC, 4µm
Tosoh
HPLC - Reversed Phase:
- TSKgel ODS-120T, 5µm
Waters
UHPLC - HILIC:
- Atlantis Premier BEH Z-HILIC, 2.5µm
- ACQUITY BEH Amide, 1.7µm
UHPLC - Reversed Phase:
- ACQUITY HSS T3, 1.8µm
- ACQUITY Premier HSS T3, 1.8µm
- XTerra MS C18, 2.5µm
- Waters ACQUITY BEH Amide Atlantis Premier BEH Z-HILIC Improved Separation of RNA Nucleotides, Nucleosides and Nucleobases
- Waters ACQUITY BEH Amide Separation of Nucleotide Phosphates
- Waters ACQUITY HSS T3 Demonstrating Improved Sensitivity and Dynamic Range with MaxPeak High Performance Surfaces (HPS) Technology: A Case Study on the Detection of Nucleotides
- Waters Atlantis Premier BEH Z-HILIC Isocratic Separation of RNA Nucleotide Triphosphates Including Pseudouridine
- Waters XTerra MS C18 Nucleotide Triphosphates
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