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mAB Analytik mittels Protein A Säulen
Analytik von Immunoglobulinen (Antikörpern) - Affinitätschromatographie mit Protein A
Analytik von Immunoglobulinen (Antikörpern) - Affinitätschromatographie mit Protein A
Immunoglobuline (Antikörper) sind Proteine, die in Menschen und Tieren als Reaktion auf bestimmte Substanzen (Antigene) gebildet werden. Zu diesen gehören unter anderem das Immunoglobulin G (IgG) und monoklonale Antikörper (mAb´s), welche in der heutigen medizinischen Forschung und Anwendung von wachsender Bedeutung sind.
Die Analytik bzw. Reinigung von Antikörpern erfolgt häufig durch Protein A Affinitätschromatographie, da Protein A die Fähigkeit besitzt viele der Immunoglobuline reversibel zu binden. Unter physiologischen Bedingungen bindet Protein A und deren rekombinanten Derivate an den Fc-Teil der Antikörper und deren Aggregate. Die Elution der Immunoglobuline erfolgt durch eine Absenkung des pH-Wertes.
Das Haupteinsatzgebiet von Protein A Affinitäts-chromatographiemedien ist das Capturing* während eines Aufreinigungsprozesses von Antikörpern. In der Industrie wird dies in großen selbst gepackten Säulen durchgeführt. Protein A HPLC Säulen werden unter anderem für die Konzentrationsbestimmung von mAb´s während einer Zelllinienauswahl oder im Upstream der Bioprozess-Optimierung verwendet. Des Weiteren lassen sich auch kleine Mengen an Immunoglobulinen für analytischen Zwecke aufreinigen.
Hersteller von Protein A Affinitätschromatographiesäulen und Bulk-Material sind:
1. Tosoh Bioscience
1. Tosoh Bioscience
Tosoh Bioscience bietet folgende analytische HPLC Säule und folgende Bulk Materialien für die Protein A Affinitätschromatographie an:
TSKgel Protein A-5PW ist eine analytische Affinitäts-HPLC-Säule für reproduzierbare und robuste Antikörper Analysen.
| Base Material | Polymethacrylat |
| Particle Size | 20 µm |
| Pore Size | 100 nm |
| Ligand | Recombinant Protein A, Hexamer of c Domain |
| pH-Stability | 2.5 - 12.0 |
| Ligand Density | 0.9 - 1.0 g/l gel |
| Exclusion Limit | 1.000 kDa |
| Dimension | 4.6 x 35 mm (PEEK) |
| Part-Number | 0023483 |
Merkmale:
- Schnelle Trennungen möglich (1-2 min/Analyse)
- Lange Lebensdauer: > 2000 Injektionen
- Hohe Sensitivität für die Bestimmung von mAb Titer
- Hohe Stabilität im alkalischen für effektive CIP-Zyklen
Applikationen:
Tosoh_PROTEIN-A_Fast-Monoclonal-Antibody-Titer-Determination.pdf
Tosoh_PROTEIN-A_improve-performance-of-the-Protein-A-capturing-step.pdf
Tosoh_PROTEIN-A_Increased-Productivity-for-downstream-processing-of-biotherapeutics.pdf
Tosoh_PROTEIN-A_Protein-A-Chromatography-The-Process-Economics-Driver-in-mAb-Manufacturing.pdf
TOYOPEARL AF-rProtein A HC-650F ist ein Hochleistungsmaterial für die Bioprozesschromatographie, mit einer außerordentlich hohen dynamischen Bindekapazität. Diese Materialien sind ebenfalls als fertig gepackte ToyoScreen– und Minichrom Säulen und als RoboColumns erhältlich.
| Base Material | Polymethacrylat |
| Particle Size | 45 µm |
| Pore Size | 100 nm |
| Ligand | Recombinant Protein A, Hexamer of c Domain |
| pH-Stability | 2.0 - 13.0 |
| DBC** | >50 g/L at 2 min Residence time >65 g/L at 5 min Residence time |
| Part-Number | 10 mL → 0023425 25 mL → 0023426 100 mL → 0023427 |
Merkmale:
- Sehr hohe dynamische Bindekapazität für human IgG
- Bindekapazität steigt mit Antikörper-Titer bis zu 10 g/L
- Schnelle Bindungskinetik und moderate Elutionsbedingungen
- Optimierte Alkalistabilität
- Minimales Leaching
Applikationen:
Tosoh_PROTEIN-A_Reproducible-Robust-Antibody-Titer-Analysis.pdf
Tosoh_PROTEIN-A_Toyopearl-AF-rProtein-A-HC-650F.pdf
Tosoh_PROTEIN-Binding-Capacity-at-various-bed-heights-and-constant-linear-velocity.pdf
2. Shodex - AFpak APA-894
2. Shodex - AFpak APA-894
| Base Material | Polyhydroxymethacrylat |
| Particle Size | 18 µm |
| Ligand | Protein A |
| pH-Stability | 2.0 - 10.0 |
| Ligand Density | 4 mg/g gel |
| Binding Capacity | 13 mg IgG Human/g resin |
| Dimension | 8.0 x 50 mm |
| Part-Number | F7118946 |
Merkmale:
- Stabiles Polymer-basiertes Packungsmaterial für schnelle Analysen
- Minimales Leaching der funktionellen Gruppen für reproduzierbare Ergebniss
3. Thermo Fisher Scientific - MAbPac Protein A
3. Thermo Fisher Scientific - MAbPac Protein A
| Base Material | Polydivinyl-benzene Core with hydrophilic surface |
| Particle Size | 12 µm |
| Ligand | Recombinant Protein A |
| pH-Stability | 2.5 - 7.5 |
| Binding Capacity | ~3.5 mg IgG/g resin |
| DBC** | 100 µg IgG/column at 2 mL/min flow rate |
| Dimension | 4.0 x 35 mm (PEEK) |
| Part-Number | 082539 |
Merkmale:
- Effiziente Säule mit niedrigen Gegendruck
- Linear über einen breiten Konzentrationsbereich (0.025 bis 5 mg/mL) ohne Verschleppung
- Exzellente Probenrückgewinnung (sample recovery)
4. Sepax - MAbPurix
4. Sepax - MAbPurix
Sepax MAbPurix ist sowohl in gepackten Säulen als auch als Bulk Material erhältlich.
| Base Material | 4% cross linked Agarose |
| Particle Size | 45 - 165 µm |
| Ligand | Recombinant Protein A |
| pH-Stability | 3.0 – 10.0 (Working range) 2.0 – 11.0 (For CIP Cycles) |
| DBC** | 33 mg human IgG/mL Resin |
| Protein A Leaching | ≤ 10 ng/mg IgG |
| Caustic Stability in 0.1 N NaOH | 100 Cycles |
| Dimension | 6.6 x 150 mm (Glass) → P/N 281085-6615 15 x 150 mm (Glass) → P/N 281085-15015 7.0 x 25 mm (Plastic) → P/N 281085-70025 16 x 25 mm (Plastic) → P/N 281085-160025 |
Merkmale:
- Sehr geringes Protein A Leaching
- Hohe Stabilität im alkalischen Medium
- Hohe Probenrückgewinnung und Reproduzierbarkeit
* Capturing bezeichnet im Bioprozess-Bereich allgemein den ersten Aufreinigungsschritt von Biomolekülen (in diesem Fall Antikörper) nach deren Herstellung. Dafür eignet sich die Protein A Affinitätschromatographie aufgrund deren hohen Selektivität für Immunoglobuline sehr gut. Auf das Capturing folgen danach die sogenannten Polishing Steps, bei denen Ionenaustausch-, HIC- oder Mixed-Mode-Chromatographie zum Einsatz kommt.
** Dynamic Binding Capacity
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