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mAB Analytik mittels Protein A Säulen
Analytik von Immunoglobulinen (Antikörpern)
Affinitätschromatographie mit Protein A
Immunoglobuline (Antikörper) sind Proteine, die in Menschen und Tieren als Reaktion auf bestimmte Substanzen (Antigene) gebildet werden. Zu diesen gehören unter anderem das Immunoglobulin G (IgG) und monoklonale Antikörper (mAb´s), welche in der heutigen medizinischen Forschung und Anwendung von wachsender Bedeutung sind.
Die Analytik bzw. Reinigung von Antikörpern erfolgt häufig durch Protein A Affinitätschromatographie, da Protein A die Fähigkeit besitzt viele der Immunoglobuline reversibel zu binden. Unter physiologischen Bedingungen bindet Protein A und deren rekombinanten Derivate an den Fc-Teil der Antikörper und deren Aggregate. Die Elution der Immunoglobuline erfolgt durch eine Absenkung des pH-Wertes.
Das Haupteinsatzgebiet von Protein A Affinitäts-chromatographiemedien ist das Capturing* während eines Aufreinigungsprozesses von Antikörpern. In der Industrie wird dies in großen selbst gepackten Säulen durchgeführt. Protein A HPLC Säulen werden unter anderem für die Konzentrationsbestimmung von mAb´s während einer Zelllinienauswahl oder im Upstream der Bioprozess-Optimierung verwendet. Des Weiteren lassen sich auch kleine Mengen an Immunoglobulinen für analytischen Zwecke aufreinigen.
Abbildung 1: Schematische Abbildung eines Antikörpers
Applikationen
Affinitätschromatographie Aufreinigung von IgG mit Tosoh TSKgel Protein A-5PW
Peakidentitäten
1. Impurities 2. IgG
Testbedingungen
Säule: TSKgel Protein A-5PW, 35x4.6mm, 20µm
Mobile Phase Bindung: 20 mmol/L Natriumphosphat, pH 7.4
Mobile Phase Elution: 20 mmol/L Natriumphosphat, pH 2.5
Gradient: 0-0.5 min Bindungspuffer, 0.5-1.1 min Elutionspuffer, 1.1-2.0 min Bindungspuffer
Flussrate: 2 mL/min
Detektion. UV, 280 nm
Probe: 20 µL CHO Zellkulturüberstand mit IgG (0.5 mg/mL)
Downloads
Hersteller Übersicht
Sepax
HPLC - Affinitätschromatographie:
- MAbPurix
Thermo Fisher
HPLC - Affinitätschromatographie:
- MAbPac
Tosoh
HPLC - Affinitätschromatographie:
- TSKgel Protein A-5PW, 20µm
- TOYOPEARL AF-rProtein A HC-650F
- Tosoh TOYOPEARL AR-rProtein A Increased productivity for downstream processin of biotherapeutics Applications
- Tosoh TSKgel Protein A-5PW Reproducible and Robust Antibody Titer Analysis Applications
- Tosoh TSKgel Protein A-5PW Fast mAb Titer Determination Applications
- TOSOH Comparison of Toyopearl AF-rProtein a HC-650F binding capacity at various bed heights and constant linear velocity
- Tosoh TOYOPEARL AF-rProtein A HC-650F Improve Performance of the Protein A Capturing Step Applications
- Tosoh TOYOPEARL AR-rProtein A HC-650F Protein A chromatography - The process economics driver in mab manufacturing Applications
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