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Affinitätschromatographie mit Protein A
Immunoglobuline (Antikörper) sind Proteine, die in Menschen und Tieren als Reaktion auf bestimmte Substanzen (Antigene) gebildet werden. Zu diesen gehören unter anderem das Immunoglobulin G (IgG) und monoklonale Antikörper (mAb´s), welche in der heutigen medizinischen Forschung und Anwendung von wachsender Bedeutung sind.
Die Analytik bzw. Reinigung von Antikörpern erfolgt häufig durch Protein A Affinitätschromatographie, da Protein A die Fähigkeit besitzt viele der Immunoglobuline reversibel zu binden. Unter physiologischen Bedingungen bindet Protein A und deren rekombinanten Derivate an den Fc-Teil der Antikörper und deren Aggregate. Die Elution der Immunoglobuline erfolgt durch eine Absenkung des pH-Wertes.
Das Haupteinsatzgebiet von Protein A Affinitäts-chromatographiemedien ist das Capturing* während eines Aufreinigungsprozesses von Antikörpern. In der Industrie wird dies in großen selbst gepackten Säulen durchgeführt. Protein A HPLC Säulen werden unter anderem für die Konzentrationsbestimmung von mAb´s während einer Zelllinienauswahl oder im Upstream der Bioprozess-Optimierung verwendet. Des Weiteren lassen sich auch kleine Mengen an Immunoglobulinen für analytischen Zwecke aufreinigen.
Abbildung 1: Schematische Abbildung eines Antikörpers