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Antikörper mAB
Monoklonale Antikörper (mAb´s) sind immunologisch aktive Proteine, die in den letzten Jahren in zunehmenden Maße in den Fokus der medizinischen Forschung gerückt sind. Heutzutage bestehen bereits eine Vielzahl moderner Pharmaka und Therapieansätze, die auf monoklonalen Antikörpern basieren
Die Analytik von monoklonalen Antikörpern hat meist zum Ziel Monomere von Dimeren, Trimeren und weiteren Aggregaten abzutrennen, da diese die Effektivität von Biopharmazeutika negativ beeinflussen können. Weiterhin lassen sich auch verschiedene Fragmente von mAb´s analysieren, z. B. Fc– oder Fab-Fragmente. Die Analytik von monoklonalen Antikörpern kann mit unterschiedlichen chromatographischen Trenntechniken durchgeführt werden.
Applikationen
1. Größenausschlusschromatographie (SEC) mit Tosoh TSkgel SuperSW mAb HR
Die SEC ist eine sehr geeignete und breit angewendete Methode für die Bestimmung von Aggregat-, Monomer- und Fragment-Gehalten von mAb´s in Analytlösungen.
Peakidentitäten
Dimer, Monomer und Fragmente von IgG
Testbedingungen
Säule: TSKgel SuperSW mAb HR 300x7.8mm
Mobile Phase: 200 mmol/L Phosphatpuffer + 0.05% NaN3, pH 6.7
Flussrate: 1 mL/min
Probe: 10 g/L IgG verdaut mit Papain für 0-24 h
Injektionsvolumen: 10 µL
Temperatur: 25 °C
Detektion: UV, 280 nm
2. Hydrophobe Interaktionschromatographie (HIC) mit Tosoh TSKgel Butyl-NPR
Die Trennung bei der Hydrophilen Interaktionschromatographie basiert auf der unterschiedlichen Oberflächenhydrophobizität von verschiedenen Proteinen. Ist dies für die jeweiligen Analyten gegeben, so lassen sich mittels HIC verschiedene Antikörper voneinander trennen, Antikörper von anderen Proteinen abtrennen aber auch Antikörperaggregate von Monomeren separieren. Die Trennung von Antikörperfragmenten ist ebenfalls möglich.
Peakidentitäten
Fragmente und Aggregate von MAb
Testbedingungen
Säule: TSKgel Butyl-NPR 35x4.6mm
Mobile Phase A: Puffer mit 3 M NaCl und 10 mM Natriumphosphat, pH 7
Mobile Phase B: 10 mM Natriumphosphat, pH 7
Gradient: 0% - 100% B in 25min
Flussrate: 1 mL/min
Detektion: Fluoreszenz
Probe: 2 µg Protein
3. Ionenaustauschchromatographie mit Tosoh TSKgel SP-STAT und CM-STAT
Mit Ionenaustauschchromatographie lassen sich verschiedene Ladungsvarianten von Antikörper, –Fragmente, –Aggregate und weitere Proteine voneinander trennen. Die verschiedenen Ladungsvarianten entstehen durch die Deamidierung von Asparagin oder Glutamin Resten oder durch unvollständigen Entfernung des C-Terminus von Lysin Resten.
Peakidentitäten
Trennung von Ladungsvarianten eines MAbs
Testbedingungen
Säulen: TSKgel SP-STAT 100x4.6mm, 7µm
TSKgel CM-STAT 100x4.6mm, 7µm
Mobile Phase A: 10 mM/L Natriumphosphat Puffer, pH 7
Mobile Phase B: 100mM/L Natriumacetat Puffer, pH 7
Gradient: 0% - 100% B in 30 min
Flussrate: 1 mL/min
Injektionsvolumen: 10 µL
Detektion: UV, 280 nm
Probe: MAb 2 g/L
4. Reversed-Phase Chromatographie mit AMT HALO 1000Å C4
Auch mittels der Reversed-Phase Chromatographie lassen sich unterschiedliche monoklonale Antikörper analysieren.
Testbedingungen
Säule: HALO 1000Å C4 100x2.1mm, 2.7µm
Mobile Phase A: Wasser, 0.1% TFA
Mobile Phase B: 80/20 Acetonitril/Wasser, 0.085% TFA
Gradient: 40% - 47.5% B in 12 min
Flussrate: 0.4 mL/min
Druck: 210 bar
Temperatur: 80 °C
Injektionsvolumen: 2 µL
Probenlösungsmittel: 70/30 Wasser/Acetonitril
Detektion: UV, 280 nm
Downloads
Hersteller Übersicht
Advanced Materials Technology™
HPLC - Reversed Phase:
- HALO® 400 Å C4 PROTEIN
- HALO® 1000 Å C4 PROTEIN
Sepax™ Technologies
HPLC - SEC:
- SRT-10, SRT-10C
- SRT, SRT-C
- Zenix, Zenix-C
- Unix, Unix-C
HPLC - HIC:
- Proteomix HIC Ethyl
- Proteomix HIC Propyl
- Proteomix HIC Butyl
- Proteomix HIC Phenyl
HPLC - IEX:
- Antibodix-NP1.7, -NP3, -NP5 und -NP10
- Proteomix SCX-NP1.7, -NP3, NP5 und -NP10
HPLC - Reversed Phase:
- Proteomix RP-300
- Proteomix RP-500
- Proteomix RP-1000
- Sepax Zenix SEC-300 Zenix-C SEC-300 SEC Screening Kit
- Sepax SRT-C 300 Analysis of MAb SEC
- Sepax Unix-C SEC-300 MAb Separation
- MAb Purification on SRT-10 300
- Sepax Zenix-C SEC-300 Rituximab Analysis
- Sepax SRT-300 Separation of Monoclonal Antibody
- Sepax Antibodix NP10 Analysis of MAb with Charge Variance
- Sepax Antibodix NP10 Analysis of MAb-X22 Impact of Initial Salt
- Sepax Antibodix NP10 Analysis of MAb-X22 Impact of Mobile Phase Ph
- Sepax Antibodix WCX-NP3 Analysis of MAb
- Sepax Proteomix SCX-NP5 MAb-IgG1 & IgG2 Charge Variants Separation
- Sepax Antibodix WCX-NP5 Proteomix SCX-NP5 Ion Exchange Kit for MAb-separation
- Sepax Proteomix HIC-Butyl-1.7 Intact & Oxidized MAb Analysis
- Sepax Proteomix HIC-Butyl-NP5 Erbitux & Rituximab MAb Separation
- Sepax Proteomix RP-1000 Column Temperature-Effect-on-MAb Separation
- Sepax Proteomix RP-1000 Proteomix RP-500 MAb Fragment
Shodex™
HPLC - SEC:
- PROTEIN LW-803
Tosoh Bioscience™
HPLC - SEC:
- TSKgel G3000SWXL
- TSKgel UP-SW3000
- TSKgel SuperSW mAb HR
- TSKgel SuperSW mAb HTP
- TSKgel UltraSW Aggregate
HPLC - HIC:
- TSKgel Phenyl-5PW
- TSKgel Ether-5PW
- TSKgel Butyl-NPR
HPLC - IEX:
- TSKgel SP-STAT
- TSKgel CM-STAT
- TSKgel Q-STAT und DNA-STAT
HPLC - Reversed Phase:
- TSKgel Protein C4-300
- Tosoh TSKgel G3000SWXL TSKgel SuperSW mAb HR TSKgel SuperSW mAb HTP High Speed and Resolution SEC Analysis of mAbs Applications
- Tosoh TSKgel UP-SW3000 UHPLC Analysis of Immunoglobulins Applications
- Tosoh TSKgel UP-SW3000 Inceased Monoclonal Antibody Resolution Applications
- Tosoh TSKgel Protein A-5PW Reproducible and Robust Antibody Titer Analysis Applications
- Tosoh TSKgel Butyl-NPR TSKgel G3000SWXL mAb Aggregate Detection Applications
- Tosoh TSKgel SP-STAT TSKgel CM-STAT Fast Analysis of IgG Charge Heterogeneity Applications
- Tosoh TSKgel Q-STAT TSKgel DNA-STAT Brochure
- Tosoh TSK-GEL SP-STAT and CM-STAT Columns
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