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Affinitätschromatographie

Die Affinitätschromatographie ist eine Biotrenntechnik, die unter Anderem für die Reinigung und Analyse von Proteinen, Nukleinsäuren oder Hormonen verwendet wird.

Grundlagen zur Affinitätschromatographie

Grundlagen zur Affinitätschromatographie
Grundlagen zur Affinitätschromatographie

Bei der Affinitätschromatographie beruht die Trennung bzw. Reinigung einer Substanz auf einer hochspezifischen biochemischen Wechselwirkung des Analyten mit bestimmten Bindungspartnern, die auf der stationären Phase gebunden sind (ähnlich Antigen-Antikörper– oder Enzym-Inhibitor–Wechselwirkung). Dabei wird nur eine Probenkomponente im vorhandenen Substanzgemisch von der stationären Phase festgehalten, während die anderen Moleküle problemlos von der Säule gespült werden können. Am Schluss bleibt die gewünschte Probe auf dem Säulenbett zurück, welche anschließend durch Verdrängung, durch Änderung des pH-Wertes oder durch Änderung der Salzkonzentration eluiert werden kann.

Abbildung 1: Schematische Darstellung der Trennung von drei Proteinen mittels Affinitätschromatographie: Bild 1: Nur Protein-2 kann an die Liganden der stationären Phase binden. Die Proteine-1 und -3 können durch Waschen entfernt werden; Bild 2: Nach Elution der Proteine-1 und -3 verbleibt Protein-2 allein auf dem Säulenbett zurück; Bild 3: Protein-2 wird unter geeigneten Bedingungen eluiert.

 

Hersteller und Säulen für die Affinitätschromatographie

 

Tosoh Bioscience™

Tosoh Bioscience ist Hersteller von HPLC-Säulen und Bulk-Material für die Affinitätschromatographie.

a. HPLC-Säulen

NameBase MaterialLigandLigand Load/GelParticle SizeApplication
TSKgel Boronate-5PWPolymethacrylate[1]m-AminophenylboronateN/A10 µmCarbohydrates (e. g. Sorbitol), Nucleic acids, Nucleosides, Nucleotides, Catecholamines
TSKgel Chelate-5PWPolymethacrylate[1]Iminodiacetic acid20 µmol/mL10 µmImmunoglobulins, Transferrin, Lectins, Milk Proteins, Membrane Proteins, Peptides
Bioassist ChelatePolymethacrylate[1]Iminodiacetic acid20 µmol/mL10 µmImmunoglobulins, Transferrin, Lectins, Milk Proteins, Membrane Proteins, Peptides
TSKgel Tresyl-5PWPolymethacrylate[1]TresylCa. 20 µmol/mL10 µmActivated packing material for synthesis of custom affinity chromatography columns
TSKgel Protein
A-5PW
Polymethacrylate[1]Recombinant protein A, Hexamer of C-Domain0.9-1.0 g/L20 µmMonoclonal Antibodies (mAb)

[1] 1000 Å Poren Größe
 

b. Bulk Material

NameBase MaterialLigandLigand Load/GelParticle SizeApplication
TOYOPEARL® AF-Chelate 650MPolymethacrylate[1]Iminodiacetic acidN/A10 µmImmunoglobulins, Transferrin, Lectins, Milk Proteins, Membrane Proteins, Peptides
TOYOPEARL® AF-Heparin HC-650MPolymethacrylate[1]Heparin20 µmol/mL10 µmPlasma Components, Lipoprotein Lipase, Collagenase, DNA Polymerase
TOYOPEARL® AF-Red-650MLPolymethacrylate[1]Procion Red HE-3B (Reactive Red 120)20 µmol/mL10 µmNucleotide Dependent Enzymes, Lipoproteins, Plasminogen, Peptides, Hormones, Cytotoxins
TOYOPEARL® AF-rProtein A-650F[3]Polymethacrylate[1]Recombinant protein A, 
Tetramer of modified
C-Domain
Ca. 20 µmol/mL10 µmMonoclonal Antibodies (mAb), IgG
TOYOPEARL® AF-rProtein A HC-650F[3]Polymethacrylate[1]Recombinant protein A, 
Hexamer of modified
C-Domain
0.9-1.0 g/L20 µmMonoclonal Antibodies (mAb), IgG

[1] 1000 Å Poren Größe, 65 µm Partikel Größe; [2] 1000 Å Poren Größe, 45 µm Partikel Größe; [3] Auch als ToyoScreen-Säulen oder ToyoScreen RoboColumns erhältlich  

Shodex™

Shodex™

NameBase MaterialLigandLigand Load/GelParticle SizeApplication
AFpak APA-894PolyhydroxymethacrylateProtein A4 mg18 µmHuman IgG, Immune complexes
AFpak ACH-494PolyhydroxymethacrylateCholineoxydase, 
Acetylcholine esterase
N/A18 µmCholine, Acetylcholine

 

Merck™

Merck™

NameBase MaterialLigandLigand Load/GelApplication
Chromolith® WP 300 Protein ASilica-Gel (monolithic)Protein AN/AMonoclonal Antibodies (mAb), IgG
Chromolith® WP 300 EpoxySilica-Gel (monolithic)EpoxyN/AUser specific[1]

[1] Chromolith® WP 300 Epoxy Säulen sind speziell entwickelt für die Nutzer-spezifische Immobilisierung von Liganden,
z.B. Protein G oder Concanavalin A, und deren späteren Anwendung in der HPLC 

.

Separation Methods Technologies™ (SMT)

Separation Methods Technologies™ (SMT)

NameBase MaterialLigandLigand Load/GelParticle SizeApplication
CIB-Protein ASilica-Gel[1]Protein AN/A5 µm, 10 µmIgG Proteins
CIB-IgGSilica-Gel[1]IgGN/A5 µm, 10 µmProtein A
CIB-OvomucoidSilica-Gel[1]OvomucoidN/A5 µmPurification of +/-Ketoprofen

[1] 100 Å Poren Größe

Agilent Technologies™

Agilent Technologies™

NameBase MaterialLigandLigand Load/GelParticle SizeApplication
Bio-Monolith Protein APoly(glycidyl methacrylate-co-ethylene dimethacrylate) highly porous monolithProtein AN/AMonolithicAll IgG (human and mouse), except IgG class3

 

Über MZ-Analysentechnik GmbH erhalten Sie Zugriff auf eine Vielzahl von Säulen für die Affinitätschromatographie. Gerne erstellen wir Ihnen ein individuelles Angebot zu Ihrer Fragestellung, sodass Sie Preise und Lieferzeiten der einzelnen Hersteller vergleichen können. Haben Sie Fragen oder wünschen Sie Beratung? Kontaktieren Sie uns! Wir beraten Sie gern.  

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