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mAB Analytik mittels Protein A Säulen

Analytik von Immunoglobulinen (Antikörpern) - Affinitätschromatographie mit Protein A

Analytik von Immunoglobulinen (Antikörpern) - Affinitätschromatographie mit Protein A

Immunoglobuline (Antikörper) sind Proteine, die in Menschen und Tieren als Reaktion auf bestimmte Substanzen (Antigene) gebildet werden. Zu diesen gehören unter anderem das Immunoglobulin G (IgG) und monoklonale Antikörper (mAb´s), welche in der heutigen medizinischen Forschung und Anwendung von wachsender Bedeutung sind.

Die Analytik bzw. Reinigung von Antikörpern erfolgt häufig durch Protein A Affinitätschromatographie, da Protein A die Fähigkeit besitzt viele der Immunoglobuline reversibel zu binden. Unter physiologischen Bedingungen bindet Protein A und deren rekombinanten Derivate an den Fc-Teil der Antikörper und deren Aggregate. Die Elution der Immunoglobuline erfolgt durch eine Absenkung des pH-Wertes.

Das Haupteinsatzgebiet von Protein A Affinitäts-chromatographiemedien ist das Capturing* während eines Aufreinigungsprozesses von Antikörpern. In der Industrie wird dies in großen selbst gepackten Säulen durchgeführt. Protein A HPLC Säulen werden unter anderem für die Konzentrationsbestimmung von mAb´s während einer Zelllinienauswahl oder im Upstream der Bioprozess-Optimierung verwendet. Des Weiteren lassen sich auch kleine Mengen an Immunoglobulinen für analytischen Zwecke aufreinigen.

 

Hersteller von Protein A Affinitätschromatographiesäulen und Bulk-Material sind:

1. Tosoh Bioscience

1. Tosoh Bioscience

Tosoh Bioscience bietet folgende analytische HPLC Säule und folgende Bulk Materialien für die Protein A Affinitätschromatographie an:

TSKgel Protein A-5PW ist eine analytische Affinitäts-HPLC-Säule für reproduzierbare und robuste Antikörper Analysen.

Base Material   Polymethacrylat
Particle Size20 µm
Pore Size100 nm
LigandRecombinant Protein A,
Hexamer of c Domain
pH-Stability2.5 - 12.0
Ligand Density0.9 - 1.0 g/l gel
Exclusion Limit1.000 kDa
Dimension4.6 x 35 mm (PEEK)
Part-Number0023483

 

Merkmale:                           

  • Schnelle Trennungen möglich (1-2 min/Analyse)
  • Lange Lebensdauer: > 2000 Injektionen    
  • Hohe Sensitivität für die Bestimmung von mAb Titer    
  • Hohe Stabilität im alkalischen für effektive CIP-Zyklen   

 

Applikationen:

Tosoh_PROTEIN-A_Fast-Monoclonal-Antibody-Titer-Determination.pdf

Tosoh_PROTEIN-A_improve-performance-of-the-Protein-A-capturing-step.pdf

Tosoh_PROTEIN-A_Increased-Productivity-for-downstream-processing-of-biotherapeutics.pdf

Tosoh_PROTEIN-A_Protein-A-Chromatography-The-Process-Economics-Driver-in-mAb-Manufacturing.pdf

TOYOPEARL AF-rProtein A HC-650F ist ein Hochleistungsmaterial für die Bioprozesschromatographie, mit einer außerordentlich hohen dynamischen Bindekapazität. Diese Materialien sind ebenfalls als fertig gepackte ToyoScreen– und Minichrom Säulen und als RoboColumns erhältlich.

Base Material   Polymethacrylat
Particle Size45 µm
Pore Size100 nm
LigandRecombinant Protein A,
Hexamer of c Domain
pH-Stability2.0 - 13.0
DBC**>50 g/L at 2 min Residence time
>65 g/L at 5 min Residence time
Part-Number10 mL → 0023425
25 mL → 0023426
100 mL → 0023427

 

Merkmale:

  • Sehr hohe dynamische Bindekapazität für human IgG
  • Bindekapazität steigt mit Antikörper-Titer bis zu 10 g/L
  • Schnelle Bindungskinetik und moderate Elutionsbedingungen
  • Optimierte Alkalistabilität
  • Minimales Leaching

 

Applikationen:

Tosoh_PROTEIN-A_Reproducible-Robust-Antibody-Titer-Analysis.pdf

Tosoh_PROTEIN-A_Toyopearl-AF-rProtein-A-HC-650F.pdf

Tosoh_PROTEIN-Binding-Capacity-at-various-bed-heights-and-constant-linear-velocity.pdf


2. Shodex - AFpak APA-894

2. Shodex - AFpak APA-894

Base Material   Polyhydroxymethacrylat
Particle Size18 µm
LigandProtein A
pH-Stability2.0 - 10.0
Ligand Density4 mg/g gel
Binding Capacity13 mg IgG Human/g resin
Dimension8.0 x 50 mm
Part-NumberF7118946

Merkmale:

  • Stabiles Polymer-basiertes Packungsmaterial für schnelle Analysen
  • Minimales Leaching der funktionellen Gruppen für reproduzierbare Ergebniss

3. Thermo Fisher Scientific - MAbPac Protein A

3. Thermo Fisher Scientific - MAbPac Protein A

Base Material   Polydivinyl-benzene Core with hydrophilic surface
Particle Size12 µm
LigandRecombinant Protein A
pH-Stability2.5 - 7.5
Binding Capacity~3.5 mg IgG/g resin
DBC**100 µg IgG/column at 2 mL/min flow rate
Dimension4.0 x 35 mm (PEEK)
Part-Number082539

Merkmale:

  • Effiziente Säule mit niedrigen Gegendruck
  • Linear über einen breiten Konzentrationsbereich (0.025 bis 5 mg/mL) ohne Verschleppung
  • Exzellente Probenrückgewinnung (sample recovery)

4. Sepax - MAbPurix

4. Sepax - MAbPurix

Sepax MAbPurix ist sowohl in gepackten Säulen als auch als Bulk Material erhältlich.  

Base Material   4% cross linked Agarose
Particle Size45 - 165 µm
LigandRecombinant Protein A
pH-Stability3.0 – 10.0 (Working range)
2.0 – 11.0 (For CIP Cycles)
DBC**33 mg human IgG/mL Resin
Protein A Leaching≤ 10 ng/mg IgG
Caustic Stability in 0.1 N NaOH100 Cycles
Dimension6.6 x 150 mm (Glass) → P/N 281085-6615
15 x 150 mm (Glass) → P/N 281085-15015
7.0 x 25 mm (Plastic) → P/N 281085-70025
16 x 25 mm (Plastic) → P/N 281085-160025

Merkmale:

  • Sehr geringes Protein A Leaching
  • Hohe Stabilität im alkalischen Medium
  • Hohe Probenrückgewinnung und Reproduzierbarkeit

* Capturing bezeichnet im Bioprozess-Bereich allgemein den ersten Aufreinigungsschritt von Biomolekülen (in diesem Fall Antikörper) nach deren Herstellung. Dafür eignet sich die Protein A Affinitätschromatographie aufgrund deren hohen Selektivität für Immunoglobuline sehr gut. Auf das Capturing folgen danach die sogenannten Polishing Steps, bei denen Ionenaustausch-, HIC- oder Mixed-Mode-Chromatographie zum Einsatz kommt.   

** Dynamic Binding Capacity

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